常規(guī)的質(zhì)粒抽提試劑盒并不適用于BAC/PAC/P1等大型質(zhì)粒DNA的抽提。這主要是因為大型質(zhì)粒DNA分子量很大，常常會 超過100kb。使用常規(guī)的抽提試劑盒不但產(chǎn)量低而且會打斷這些大分子量的質(zhì)粒DNA。該試劑盒將采用經(jīng)典堿裂解法和硅膠 柱純化技術(shù)，硅膠柱在獨特的結(jié)合緩沖液中能高效地回收大片段質(zhì)粒DNA的同時，減少質(zhì)粒斷裂的可能性。
大提試劑盒適合于從50-250ml細菌培養(yǎng)液中純化大分子量的質(zhì)粒載體，或各種BAC，PAC，粘粒，Cosmid等載體。 純化的質(zhì)?？芍苯佑糜诖笃螠y序，酶切，PCR,文庫制備等應(yīng)用。細菌收集后，加入Buffer T1/T2裂解，再加入Buffer T3離心沉淀去除蛋白質(zhì)和染色體DNA，在得到的上清液中加入獨特的結(jié)合液并轉(zhuǎn)移至結(jié)合柱進一步去除蛋白質(zhì)，經(jīng)過簡單的兩次洗滌即可得到高純度的BAC/PAC/P1等大片段質(zhì)粒DNA。